1. Définition.

La teneur en lysozyme est le résultat obtenu par l'application de la méthode décrite ci-après. Elle est exprimée en mg par gramme.

2. Domaine d'application.

La méthode s'applique aux blancs d'oeufs.

3. Principe.

Séparation des principales protéines du blanc d'oeuf par chromatographie liquide haute pression (C.L.H.P.). Identification et calcul de la teneur en lysozyme par étalonnage externe.

La méthode ne tient pas compte de l'activité biologique de l'enzyme.

4. Réactifs.

Les réactifs doivent être de qualité analytique. L'eau utilisée doit être de l'eau distillée ou de l'eau de pureté au moins équivalente.

4.1. Tampon de dilution et d'élution : dihydrogénophosphate de sodium 0,01 M ajusté à pH 2,2 par l'acide orthophosphorique. Ce tampon doit être filtré et soigneusement dégazé avant son utilisation.

4.2. Lysozyme pur cristallisé.

4.3. Papier Whatman 40 ou équivalent.

5. Appareillage.

Matériel courant de laboratoire et, notamment :

5.1. Ensemble pour C.L.H.P. :

- colonne de gel filtration type Protein-Pak T.S.K. ou équivalent (diamètre des particules 10 mm, diamètre de la colonne 7,8 mm ; longueur de la colonne 30 cm) ;

- détecteur U.V. ou spectrophotomètre (longueur d'onde utilisée :

280 nm).

6. Mode opératoire.

Préparer une solution standard de lysozyme à 0,1 mg/ml dans le tampon (4.1). Filtrer sur (4.3). Diluer le blanc d'oeuf ou l'ovoproduit à base de blanc d'oeuf (m grammes) dans un volume v (v en ml) de tampon (4.1) de façon à avoir dans la dilution une concentration en lysozyme voisine de celle de la dilution standard (diluer le blanc d'oeuf environ 50 fois).

Filtrer sur (4.3).

Régler le débit de la pompe du C.L.H.P. sur 1 ml par minute.

Injecter de 10 à 30 ml de solution standard de lysozyme ou de dilution adéquate de l'échantillon à analyser.

Eluer pendant douze minutes, minimum.

Dans les conditions d'analyse, le lysozyme est élué à un temps moyen de sept minutes trente secondes.

Calculer la surface du pic de lysozyme (s) dans la solution standard de concentration connue (C) en mg/g et la surface du même pic (S) dans l'échantillon de concentration inconnue (X) en mg/g dilué (d) fois :

d = vm

7. Expression des résultats.

La teneur en lysozyme exprimée en mg/gramme dans l'échantillon à analyser est donnée par la relation suivante :

X = C.S.s / d.