4. Réactifs.

Tous les réactifs doivent être de qualité analytique.

L'eau utilisée pour la préparation des solutions d'enzymes et des échantillons doit être d'une pureté au moins égale à celle de l'eau bidistillée sur verre.

4.1. Solution d'hexacyanoferrate (II) de potassium.

Dissoudre 15 g d'hexacyanoferrate (II) de potassium (K4Fe(CN)6,3H2O) dans l'eau et compléter à 100 ml.

4.2. Solution de sulfate de zinc.

Dissoudre 30 g de sulfate de zinc (ZnSO4, 7H2O) dans l'eau et compléter à 100 ml.

4.3. Solution d'hydroxyde de sodium 0,1 M.

Dissoudre 4,00 g d'hydroxyde de sodium (NaOH) dans l'eau et compléter à 1 000 ml.

4.4. Tampon triéthanolamine pH 7,6.

Dissoudre 14,0 g de chlorhydrate de triéthanolamine (C6 H15 NO3, HC1). 0,25 g de sulfate de magnésium (MgSO4, 7H2O) dans environ 80 ml d'eau. Ajuster à pH 7,6 avec une solution d'hydroxyde de sodium environ 5 M. Compléter à 100 ml avec de l'eau.

Conservation quatre semaines à + 4 °C.

Réchauffer à environ 25 °C au moment de l'emploi.

4.5. Tampon citrate pH 4,6.

Dissoudre 6,9 g d'acide citrique (C6H8O7,H2O) et 9,1 g de citrate trisodique (C6 H5 Na3 O7, 2 H2O) dans environ 150 ml d'eau. Ajuster à pH 4,6 avec une solution d'hydroxyde de sodium environ 2 M.

Compléter à 200 ml avec de l'eau.

Conservation un an à + 4 °C.

4.6. b-fructosidase (5 mg/ml).

Dissoudre 10 mg de b-fructosidase dans 2 ml de tampon citrate (4.5).

Conservation un an à + 4 °C.

4.7. Solution de nicotinamide-adénine-dinucléotide-phosphate (NADP).

Dissoudre 100 mg de NADP-Na2 dans 10 ml d'eau.

Conservation un an à + 4 °C.

4.8. Solution d'adénosine-5'-triphosphate (ATP).

Dissoudre 500 mg d'ATP - Na2 H2, 3H2 O et 500 mg d'hydrogénocarbonate de sodium (NaHCO3) dans 10 ml d'eau.

Conservation quatre semaines à + 4 °C.

4.9. Hexokinase/glucose-6-phosphate-déshydrogénase (2mg HK/ml.1mg G-6-PDH/ml), en suspension dans une solution de sulfate d'ammonium 3,2 M.

Conservation un an à + 4 °C.

4.10. Phosphoglucose isomérase (P.G.I.) (2 mg/ml), en suspension dans une solution de sulfate d'ammonium 3,2 M.

L'activité spécifique de la suspension de phosphoglucose isomérase (E.C. 5.3.1.9) doit être d'au moins 350 U/mg à 25 °C avec le fructose-6-phosphate comme substrat.

Conservation un an à + 4 °C.

4.11. Solution de saccharose, glucose, fructose.

Dissoudre 10,000 g de saccharose (C12 H22 O11), 1,000 g de glucose anhydre (C6 H12 O6) et 1,000 g de fructose (C6 H12 O6) dans l'eau et compléter à 100 ml.

5. Appareillage.

Matériel courant de laboratoire, et notamment :

5.1. Balance analytique.

5.2. Bécher d'une capacité de 50 ml.

5.3. Fiole jaugée d'une capacité de 100 ml, classe B.

5.4. Pipettes de précision permettant de délivrer 2-1-0,2-0,05 et 0,02 ml.

5.5. Pipettes de 5 ml graduées au 1/10.

5.6. Entonnoir, diamètre 7 cm.

5.7. Papier filtre, diamètre 15 cm, Whatman n° 40 ou équivalent.

5.8. Film plastique étirable (Type parafilm) pour obturation des cuves.

5.9. Spectrophotomètre réglé à 340 nm et équipé de cuves de 10 mm de parcours optique.