Le résidu laissé par l'extrait benzénique du vin ou du jus de raisin est minéralisé par combustion dans l'oxygène, par la méthode de Schöniger. Après hydrolyse des pyrophosphates formés, les phosphates sont dosés par colorimétrie après réduction du phosphomolybdate d'ammonium.

La réaction colorée sensible à 5 microgrammes de phosphore permet, à partir d'une prise d'essai de 200 ml de vin ou de jus de raisin, de contrôler la présence d'insecticides organo-phosphorés (qui renferment entre 8 et 14 p. 100 de phosphore), à des teneurs supérieures à 0,3 mg/l.

Les essais effectués à ce jour situent à moins de 0,03 mg par litre la teneur en phosphore organique extrait des vins ou des jus de raisin.

MATERIEL

Identique à celui de la méthode n° 1.

REACTIFS

a) Benzène pur redistillé.

b) Sulfate de sodium cristallisé pur.

c) Solution pour l'imprégnation du papier.

NaOH ... 2,5 g.

Eau distillée ... 10 ml.

CH2 OH ... 90 ml.

d) Solution H2SO4 N.

e) Réactif molybdique :

Peser 8,3 g de molybdate d'ammonium tétrahydraté (ou 7,5 g de molybdate de sodium di-hydraté) et les dissoudre dans 200 ml d'eau distillée en tiédissant. Laissez refroidir et ajouter 100 ml d'acide chlorhydrique pur. Diluer à 500 ml avec de l'eau distillée. Mélanger. Le réactif limpide peut être utilisé immédiatement.

f) Acétate d'éthyle.

g) Solution aqueuse d'hydroquinone à 2 p. 100. A conserver au réfrigérateur et à rejeter après brunissement.

h) Solution d'acide chlorhydrique dilué au 1/10 en volume.

i) Solution aqueuse de sulfite de sodium anhydre à 15,5 g pour 100 ml.

j) Solution titrée de phosphate :

Solution-mère : dissoudre 4,394 g de phosphate monopotassique pur dans de l'eau distillée, amener à 1 litre dans un

ballon jaugé après avoir introduit 5 ml de chloroforme.

Solution de travail à 25 microgrammes de P (phosphore) par ml.

Prendre 5 ml de solution-mère et les diluer à 200 ml dans un ballon jaugé.

MODE OPERATOIRE

Extraction

Dans un flacon émeri de 500 ml, introduisez :

250 ml de vin ou de jus de raisin ;

20 à 25 g de sulfate de sodium cristallisé ;

200 ml de benzène redistillé.

Après cinq minutes d'agitation mécanique, introduisez l'extrait dans une ampoule à décantation. Après un repos suffisant pour une complète séparation des phases, évacuez la phase inférieure dans une deuxième ampoule à décantation.

Lavez la phase benzénique au moyen de 20 à 25 ml d'eau distillée qui sont ensuite récupérés dans la deuxième ampoule.

Ajoutez 100 ml de benzène dans la deuxième ampoule et agitez modérément pendant deux à trois minutes. Après séparation, évacuez la phase aqueuse. Lavez la phase benzénique avec 20 ml d'eau distillée.

Les phases benzéniques réunies sont lavées avec 20 à 25 ml d'eau distillée.

Après vidange de l'eau, filtrez la phase benzénique sur papier dans le ballon de l'évaporateur rotatif.

Evaporez sous vide en plongeant le ballon dans un bain-marie à 50-60° C et le récepteur dans de l'eau glacée.

Combustion

Plongez le papier spécial pour combustion, maintenu au moyen de pinces, dans la solution c. Faites sécher sous jet d'air froid.

Dissolvez le résidu de l'évaporation par de l'éther sulfurique de manière à le déposer en totalité au moyen de plusieurs lavages sur le papier à combustion. (Lorsque l'évaporation aura été réalisée dans un ballon de grande capacité : 500 à 1000 ml, transvasez dans un premier temps le résidu d'évaporation dans un petit bécher de 50 ml au moyen de quatre ou cinq lavages par 5 ml d'éther sulfurique. Evaporez la presque totalité de l'éther, rincez les parois du bécher avec de l'éther et déposez l'extrait éthéré sur le papier au moyen d'une seringue).

Pliez le papier et insérez-le dans le panier en platine suspendu au bouchon de la fiole à combustion. Veillez à ce que le panier soit à la distance la plus grande possible des parois du ballon, à 2 cm environ au-dessus du liquide absorbant, si nécessaire au moyen d'une rallonge en verre résistant à la chaleur placée entre le crochet du bouchon rodé et le panier.

Introduisez dans la fiole à combustion de 1000 ml :

20 ml de solution N d'acide sulfurique ;

Un barreau magnétique.

Déplacez l'air par un flux d'oxygène. Bouchez la fiole.

Enflammez le papier dans le dispositif de sécurité.

Retirez la fiole et déposez-la sur un agitateur magnétique. La fiole ne sera ouverte qu'après vingt minutes d'agitation, l'atmosphère à l'intérieur du ballon étant parfaitement éclaircie.

Prélevez 16 ml exactement de solution de la fiole à combustion, et introduisez-les dans un ballon à fond rond de 250 ml.

Maintenez une douce ébullition sous reflux pendant trente minutes.

Dosage colorimétrique

Après refroidissement dans une ampoule à décantation de 125 ml, introduisez :

Le contenu du ballon et 4 ml d'eau distillée de rinçage ;

4 ml de réactif molybdique ;

20 ml d'acétate d'éthyle.

Agitez modérément pendant une minute, laissez reposer cinq minutes. Agitez énergiquement pendant 1 minute. Une seule extraction suffit.

Evacuez la phase aqueuse sans perte de la phase organique.

Décantez la phase acétate d'éthyle par l'orifice supérieur de l'ampoule, dans une deuxième ampoule à décantation propre. Ne pas rincer.

Introduire ensuite, en agitant après chaque addition de réactif :

1 ml de sulfite de sodium anhydre à 15,5 p. 100 ;

14 ml d'eau distillée ;

1 ml d'hydroquinone à 2 p. 100 ;

1 ml d'acide chlorhydrique au dixième.

Agitez énergiquement ; laissez reposer jusqu'à séparation complète des deux phases (au moins 15 minutes) et vidangez ensuite la phase aqueuse colorée en bleu dans un ballon de 20 ml.

Rincez l'ampoule avec 1 ou 2 ml d'eau distillée, laissez reposer et complétez à 20 ml avec cette eau de lavage.

Mélangez le contenu du ballon.

Mesurez l'absorption de la solution limpide par rapport à celle de l'essai témoin (préparé à partir de 10 ml d'eau distillée et des différents réactifs) dans des cuves de 1 cm d'épaisseur, au moyen d'un photocolorimètre muni d'un écran rouge (écran n° 70 de Jobin et Yvon), ou à l'aide d'un spectrophotomètre à 720 nm.

Le résultat sera calculé à partir d'une droite d'étalonnage obtenue à partir des mesures colorimétriques données par l'équivalent de 25-50 et 75 microgrammes de phosphore (soit 1,2 et 3 ml de solution titrée de travail) en suivant la même technique. A titre d'indication, on notera que des mesures d'étalonnage ont été traduites par la relation :

q mg = (0,190 plus ou moins 0,004) x D720

q mg étant la quantité de phosphore en milligrammes dans la prise d'essai.

L'analyse colorimétrique étant effectuée sur les 8/10 de la prise d'essai primitive, soit 200 ml de vin, le résultat sera, par exemple avec l'étalonnage précédent.

(0,190 x 5 x D) mg de P par litre

ou

(0,95 x D) mg de P par litre.