1. Objet et domaine d'application.

Détermination de la teneur en phosphore total des produits diététiques et de régime.

2. Définition.

La teneur en phosphore correspond à la masse de phosphore déterminée suivant la méthode ci-après, et exprimée en milligrammes pour 100 g de substance étudiée.

3. Principe de la méthode.

L'échantillon est minéralisé par voie humide et mis en solution acide. La solution est traitée par le réactif vanadomolybdique. L'absorbance est mesurée au spectrophotomètre à 430 nm.

4. Réactifs.

L'eau utilisée dans toutes les opérations est de l'eau bidistillée.

4.1. Acide nitrique p. a (rhô = 1,38 à 1,42 g/ml).

4.2. Acide sulfurique p. a (rhô = 1,64 g/ml).

4.3. Magnésie pure p. a.

4.4 solution de molybdate d'ammonium p. a. :

(NH4)6 MO7 O24, 4 H2O à 10 % m/v

Dissoudre 100 g de molybdate d'ammonium dans 500 ml d'eau à 50 degrés C, refroidir, ajouter 100 ml d'acide sulfurique (4.2) et amener à 1 000 ml.

4.5. Solution de monovanadate d'ammonium (NH4 VO2) à 2,5 g par litre. Dissoudre 2,5 g de monovanadate d'ammonium dans 500 ml d'eau chaude, refroidir, ajouter 20 ml d'acide nitrique (4.1). Amener à 1 000 ml.

4.6. Solution étalon à 100 mg de phosphore par litre. Dissoudre dans de l'eau 439,4 mg de phosphate monopotassique séché à étuve à 103 degrés C et amener à un litre.

Note - Conserver les solutions de molybdate d'ammonium (4.4) et de monovanadate d'ammonium (4.5) dans des flacons de polyéthylène.

5. Appareillage.

Matériel courant de laboratoire, et notamment :

5.1. Matras de Kjeldahl de 300 ml.

5.2. Spectrophotomètre.

6. Mode opératoire.

6.1. Minéralisation :

Introduire dans un matras de Kjeldahl (5.1) une quantité de substance pesée avec précision et renfermant de 5 à 10 mg de phosphore. Ajouter 100 à 200 mg de magnésie (4.3) et 2 à 3 ml d'acide nitrique (4.1).

Le matras étant tenu avec une pince en bois, chauffer son contenu au-dessus de la flamme d'un bec de gaz (sous la hotte), tout en agitant constamment. On observe un départ de vapeurs rutilantes, puis de vapeurs blanches d'acide nitrique. Amener le contenu du matras à sec. A ce stade, il arrive que l'extrait sec qui tapisse les parois du matras entre en ignition. En général, il se forme un dépôt de cendres noires ou grises, en même temps que se dégagent des vapeurs rutilantes provenant de la décomposition des nitrates.

Après refroidissement, reprendre par 2 ml d'acide nitrique (4.1) en mouillant la totalité de la matière sèche incomplètement incinérée. Porter à ébullition. Chauffer à sec. On observe encore des ignitions de place en place. S'il subsiste encore un dépôt noir, on répète l'opération jusqu'à obtention d'un résidu uniformément blanc.

Après refroidissement, reprendre par 20 ml d'eau et 2 ml d'acide sulfurique (4.2). Porter à ébullition pour chasser la majeure partie de l'acide nitrique.

Ajouter 100 ml d'eau et porter trente minutes au bain d'eau bouillante pour hydrolyser les pyro et polyphosphates qui ont pu se former au cours du chauffage à sec.

Après refroidissement, transvaser quantitativement dans une fiole jaugée de 100 ml et compléter à 100 ml avec de l'eau.

6.2. Etablissement de la courbe étalon :

Dans des fioles jaugées de 100 ml, introduire respectivement 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 et 10 ml de la solution étalon (4.6), puis les réactifs ci-après dans l'ordre :

- 20 ml d'acide sulfurique (4.2) dilué au 1/10 v/v ;

- 10 ml de la solution vanadique (4.5) ;

- 10 ml de la solution molybdique (4.4).

Amener à 100 ml avec de l'eau, attendre trente minutes, mesurer l'absorbance au spectrophotomètre à 430 mm par rapport à un témoin (blanc) préparé en même temps que les solutions et comprenant uniquement les réactifs. Tracer la courbe d'étalonnage en portant en abscisse les quantités en milligrammes de phosphore contenues dans 100 ml et en ordonnée les absorbances lues au spectrophotomètre.

6.3. Dosage :

Introduire dans une fiole jaugée de 100 ml une partie aliquote de la solution obtenue en 6.1 (par exemple : 10 ml, si la prise d'essai renferme une quantité de phosphore de l'ordre de 5 mg). Ajouter dans l'ordre :

- 20 ml d'acide sulfurique (4.2) dilué au 1/10 v/v ;

- 10 ml de solution vanadique (4.5) ;

- 10 ml de solution molybdique (4.4).

Amener à 100 ml avec de l'eau. Attendre trente minutes. Mesurer l'absorbance au spectrophotomètre à 430 nm, par rapport au témoin composé des réactifs, comme lors de l'établissement de la courbe d'étalonnage.

7. Expression des résultats.

7.1. Mode de calcul :

La teneur en phosphore total de l'échantillon en milligrammes pour cent est égale à :

M x 10 000/P x n

où :

P est la masse en grammes de la prise d'essai ;

n le nombre de millilitres de la solution hydrolysée utilisée ;

M la teneur en milligrammes de phosphore lue sur la courbe d'étalonnage.

7.2. Répétabilité :

La différence entre les résultats de deux déterminations effectuées simultanément ou rapidement l'une après l'autre par le même analyste ne doit pas excéder 5 % en valeur relative.